2022-07-12 14:01:29
血型和输血
红细胞AB0血型系统
（一）AB0血型系统的抗原及抗体检查
1.ABO血型抗原
要点1：
AB0抗原的遗传座位在第9号染色体的长臂3区4带，有A、B、O三个等位基因。A和B基因对于0基因而言为显性基因，0基因为隐性基因。父母双方如各遗传给子代一个基因，则可组成6个基因型；O0、AA、A0、BB、BO、AB；4种表现型：A、B、O、AB。
要点2：
5～6周胎儿红细胞已可测出ABH抗原。新生儿A、B抗原位点较成人少，一般在生后18个月时才能充分表现出抗原性，但抗原性也仅为成人的20%。此外，ABH抗原频率亦随种族而不同。所谓H抗原是形成A、B抗原的结构基础。
要点3：
ABH抗原不仅存在于红细胞膜上，也可存在于白细胞、血小板及其他组织细胞上。ABH血型特异物质存在于唾液（含量最丰富）、尿、泪液、胃液、胆汁、羊水、血清、、汗液、乳汁等体液中，但不存在于脑脊液。这些可溶性抗原又被称为“血型物质”。
要点4：
血型物质意义：
①测定唾液血型物质，可辅助鉴定血型。
②中和AB0血型系统中的“天然抗体”，有助于检查免疫性抗体，鉴别抗体的性质。
③检查羊水可预测胎儿AB0血型等。
2.AB0系统抗体
要点1：
AB0系统抗体分天然抗体与免疫性抗体：天然抗体是在没有可觉察的抗原刺激下而产生的抗体，以IgM为主，又称完全抗体或盐水抗体；也可能是由一种无觉察的免疫刺激产生而得。免疫性抗体：有IgM、IgG、IgA，但主要是IgG。抗A和抗B可以是IgM与IgG，甚至是IgM、IgG、IgA的混合物，但主要是IgM，而0型血清中以IgG为主。
要点2：
天然抗体和免疫抗体的主要区别：
（1）天然抗体能被血型物质中和，而免疫性抗体则不能；
（2）天然抗体在盐水中能与相应红细胞发生肉眼可见凝集，而免疫性抗体则不能；
（3）天然抗体不通过胎盘，而免疫性抗体能通过胎盘。
要点3：
O型人血清中不仅有抗A、抗B抗体，还含有一种抗A、B抗体。它与A型或B型红细胞都能凝集，但当用A或B型红细胞分别吸收时，不能将其分为特异的抗A和抗B。所以，不可能在抗A和抗B的混合液中找到抗A、B具有的血清学活性。这可能是O型血清中的抗A、B是一种直接针对A和B抗原的共同抗体结构。
（二）AB0血型系统的亚型
要点1：
AB0血型系统中以A亚型最多见，A亚型主要有A1和A2，占全部A型血的99.9%，其他A亚型（A3、AX、AM）为数少；作AB0血型鉴定时，应加O型血清，以防对A亚型误定型。B亚型（B3、BM、BX）比A亚型少见，临床意义不大。
要点2：
A1亚型的红细胞上具有A1和A抗原，其血清中含有抗B抗体；A2亚型的红细胞上只有A抗原，其血清中除含抗B抗体外，还有少量抗A1抗体。在直接凝集反应中，A1、A2亚型两种红细胞的A1与A2抗原均能与抗A试剂发生凝集反应。但抗A1不仅存在于A2亚型，在B型和0型人的血清中除含抗A外还有抗A1，所以可以从B型人血清中获取抗A1试剂。
由于A抗原中A1、A2两种主要亚型，AB型也有A1B和A2B两种主要亚型。
A1B红细胞上有A1、A、B三种抗原
血清中无任何抗体
要点3：
A1、A2亚型的鉴定方法：以抗A1试剂可区别Al、A2血清，方法是：①可从B型人血清获取抗A1试剂，B型血清有抗A、抗A1，其中抗A抗体能与A型红细胞的Al、A2抗原凝集，如吸收抗A，就只剩下抗A1。②鉴定A1、A2亚型，凡与抗A1试剂发生凝集反应者为A1，如果同时还与抗B凝集，则为A1B型；不与抗A1试剂凝集者，为A2或A2B型。
鉴定A1、A2亚型，应用抗A1血清。
要点4：
A1、A2亚型鉴定的意义：目的是防止误定血型。尽管我国A2、A2B型在A与AB型中所占比例少于1%，但定型时易将弱A亚型误定为O型，如果给其输入0型血，不会有太大问题，但是如果把弱A亚型误定为O型，并输给O型人，则受血者的抗A抗体就可能与输入的弱A亚型的红细胞起反应，引起血管内溶血性输血反应。因此，应避免将弱的A亚型定为0型。
所以，必须避免将弱A亚型误判为O型。
如：Ax型红细胞与B型血清（抗A抗体）不发生凝集，但与0型血清可发生程度不一的凝集，这可能是因为0型血中抗A效价比B型血抗A效价高，故现做AB0血型鉴定时，应加0型血清（内含抗A、抗B及抗AB），以防将Ax型误定为0型。
（三）AB0血型鉴定
要点1：
常用盐水凝集法：
①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。
②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中未知的抗体。
结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。ABO血型定型原则见下表。
ABO血型定型
要点2：
玻片法凝集结果判断：玻片法凝集结果是以凝块大小和游离红细胞多少综合判定的。
要点3：
注意事项：红细胞亚型抗原性弱，如抗A抗B标准血清效价低时，易造成漏检或误定。如加用0型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此类错误。
要点4：
鉴定方法
（1）生理盐水凝集法：①玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于反向定型。②试管法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。
（2）凝胶微柱法：是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。
要点5：
抗A、抗B和抗AB标准血清
标准血清均采自健康人，并应符合下述条件：
①特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。
②效价：我国标准抗A和抗B血清效价均在1：128以上。
③亲和力：我国标准要求抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是15s、30s和45s；抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s。凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2。
④冷凝集素效价：在1：4以下。
⑤无菌。
⑥灭活补体。
要点6：
血型鉴定操作时注意事项：
①所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。
②加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。
③虽然IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4℃最强，但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温20℃～24℃内进行试验，而37℃条件，可使反应减弱。
④幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，最好采用试管法鉴定血型。
⑤玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。
⑥正、反定型结果一致才可发报告。
⑦反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免疫抑制，血型抗体可减弱或消失；血清中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困难。
新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且自身血型抗体效价又低，因而出生6个月以内的婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅度下降或被检者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗体，可引起假阴性或血型鉴定错误。
练习题
在B型和O型血人的血清中除含抗A外，还有
A.抗A1
B.抗A2
C.抗A3
D.抗Ax
E.抗Am
[答疑编号700810050101]
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关于A亚型鉴定，如果能与抗A1和抗B试剂同时发生凝集反应则鉴定为
A.A1型
B.AB型
C.A1B型
D.A型
E.A2B型
[答疑编号700810050102]
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ABO血型鉴定时，应加O型血清的目的是
A.提高效率
B.加快速度
C.以防将Ax型误定为O型
D.以防漏诊B亚型
E.以防误诊AB型
[答疑编号700810050103]
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玻片法做ABO血型鉴定时，如果肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。于镜下观察，每凝集团中有5～8个以上红细胞凝集为
A.－
B.±
C.1＋
D.2＋
E.3＋
[答疑编号700810050104]
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关于血型鉴定的标准血清质量标准的叙述，错误的是
A.抗A和抗B血清效价均在1：128以上
B.抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是45s、30s和15s
C.抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s
D.凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2
E.冷凝集素效价：在1：4以下
[答疑编号700810050105]
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（四）交叉配血法
要点1：
盐水配血法：简便快速。主要缺点是只能检出不相配合的完全抗体，而不能检出不完全抗体。
抗球蛋白法配血法：又称Coombs试验。是最可靠的确定不完全抗体的方法，但操作繁琐。抗球蛋白法配血法是最早用于检查不完全抗体的方法。
要点2：
直接抗球蛋白法可检查受检者红细胞是否已被不完全抗体致敏；间接抗球蛋白法可用于鉴定Rh血型及血清中是否存在不完全抗体。本法虽较灵敏，但也有一定限度，且操作复杂，不利于急诊检查和血库的大批量工作。
要点3：
试剂：抗球蛋白试剂盒：包括抗广谱、抗C3、抗IgG等3种试剂。
阳性对照：IgG型抗D致敏5%RhD阳性红细胞生理盐水悬液。
阴性对照：正常人5%O型红细胞生理盐水悬液。
要点4：注意事项：
①标本采集后应立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗体从细胞上丢失。
②抗人球蛋白血清应按说明书最适稀释度使用，否则可产生前带或后带现象而误为阴性结果。
③阴性对照凝集：可能是抗人球蛋白血清处理不当，仍有残存的种属抗体，或被细菌污染，应更换血清重做试验。
核实阴性结果方法：在该试管中加1滴IgG致敏红细胞，如结果为阳性，则表示试管内的抗球蛋白血清未被消耗，阴性结果可靠。
④阳性对照不凝集：可能是抗人球蛋白血清或用于致敏红细胞的不完全抗D血清失效，或红细胞未洗净带人球蛋白所致，应更换血清或洗净红细胞后重做。
⑤如需了解体内致敏红细胞的免疫球蛋白的类型，则可分别以抗IgG、抗IgM或抗C3单价抗球蛋白血清进行试验。
要点5：
聚凝胺法配血法：可以检出IgM与IgG两种性质的抗体，能发现可引起溶血性输血反应的几乎所有规则与不规则抗体，故本法已逐渐推广使用。
配血原理：聚凝胶分子是带有高价阳离子多聚季铵盐，溶解后带有很多正电荷可以中和红细胞表面负电荷，有利于红细胞凝集，低离子强度溶液也能减低红细胞的Zeta电位，可进一步增加抗原抗体间的吸引力。
当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时，与红细胞发生紧密结合，此时加入枸橼酸盐解聚液以消除聚凝胶的正电荷，使IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生凝集不会散开。如血清中不存在IgM或IgG类血型抗体，加入解聚液可使非特异性凝集消失。
要点6：
凝胶配血法：又称微管（板）凝胶抗球蛋白试验，此法在凝胶中进行，保持了传统抗球蛋白试验的准确、具有简便、可靠的特点，全自动血型分析仪进行交叉配血，也是利用凝胶配血。
要点7：
其他可检出不完全抗体的方法有蛋白酶法、胶体介质法等。卡式配血／血型鉴定检测法已成为国际安全输血检查的推荐方法。
要点8：
质量控制
（1）血液标本：交叉配血的血液标本，受血者标本应为新鲜血，供血者标本应为血袋两端刚剪下小管中的血液。
（2）选用方法：用试管法做交叉配血。
（3）溶血现象：配血管出现溶血现象，为配血不合。
要点9：
AB0血型鉴定及交叉配血中常见错误
1.分型血清方面的原因
（1）患者纤维蛋白原增高或为异常蛋白血症：如多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症等，可产生缗线状假凝集。新生儿脐血中含有华顿胶或操作中使用了质量差的玻璃管（瓶），误认其脱下的胶状硅酸盐为串钱状凝集。
（2）患者输入了高分子血浆代用品或静脉注射造影剂等药物：可引起红细胞聚集，易误认为凝集。
（3）血清中可能存在的不规则抗体：如A2和A2B型患者血清内有抗A1抗体，能凝集A1红细胞。此外还有抗Ⅰ抗体等。有些癌症患者（如胃癌、胰腺癌等）血中含有大量可溶性A或B物质，这些物质可中和抗血清的抗体，从而抑制反应。造成假性不凝集。克服的办法是红细胞先洗涤后再试验。
（4）婴儿尚未产生自己的抗体或有从母亲获得的血型抗体：新生儿不宜用血清作反定型。
（5）老年人血型抗体水平下降：某些免疫缺陷的人或慢性淋巴细胞白血病，遗传性无丙种球蛋白血症以及有些用了免疫抑制剂的患者，由于免疫球蛋白下降，血型抗体也下降甚至缺如。可出现反向定型错误。
要点10：
红细胞方面的原因
（1）用近期内输过血的患者血液做对照红细胞：此时，患者血液红细胞为混合型细胞。
（2）患者红细胞被大量抗体包被：例如某些自身免疫疾病或新生儿溶血病患者的红细胞，或红细胞悬浮于高浓度蛋白的介质中，红细胞都会自发地发生凝集。
（3）红细胞膜有遗传性或获得性异常。
（4）抗原变异：A或B的弱抗原易判为不凝集（假阴性），而由细菌引起的获得性类B抗原易误判为阳性。有些细菌含有乙酰基酶，能使特异性A型物质末端的N-乙酰氨基半乳糖水解成半乳糖，从而使A型获得类B抗原后易误定为AB型。由于患白血病或某些恶性肿瘤使A或B抗原变弱。婴儿及老年人的红细胞抗原也较青壮年为弱。
（5）血清中有高浓度血型物质：当用血清配制红细胞悬液时，血型物质则会中和分型血清中的抗体，而不再与红细胞抗原起反应。
（6）红细胞被细菌污染：细菌的酶消化了红细胞表面的唾液酸，暴露了人人都有的T抗原，被具有抗T活性的IgM凝集。
（7）嵌合体现象：混合细胞群见于异卵双生子。如，有98%Ｏ型红细胞，2%B型红细胞会定为Ｏ型，但血清中只有抗A抗体。
要点11：
操作方面的原因：是最常见原因。
（1）操作器材：玻璃器皿不洁或使用了严重污染的血清、红细胞，可出现假阳性。试管污染洗涤剂会造成假阴性。
（2）红细胞与血清比例和离心：红细胞与血清比例不当、过度离心或离心不足可引起假阳性或假阴性。
（3）溶血现象：误认为溶血现象为阴性结果。
（4）试验温度：温度过高会造成假阴性。ABO血型系统的IgM抗体最适温度为4℃～22℃，如达37℃凝集力即下降。
（5）信息记录差错：标本、试剂、标签、加样弄错，或出现记录错误。大批标本检查时搞错标本号，张冠李戴最易造成错误。
要点12：
AB0血型系统主要临床意义
1.输血：是治疗与抢救生命的重要措施。输血前必须检查血型，选择血型相同的供血者，进行交叉配血，结果完全相合才能输血。
2.新生儿溶血病：母婴AB0血型不合引起的新生儿溶血病（常为第1胎溶血），主要依靠血型血清学检查作出诊断。
3.器官移植：受者与供者必须AB0血型相符才能移植。
习题
盐水介质交叉配血时，当血清和红细胞发生肉眼可见的凝集反应，则血清中的抗体是
A.IgM
B.IgG
C.IgE
D.IgA
E.IgA＋IgE
[答疑编号700810050106]
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交叉配血用酶介质法，其中酶的作用是
A.在红细胞膜表面之间起桥梁作用
B.在致敏抗体之间起桥梁作用
C.中和红细胞表面电荷
D.改变致敏抗体结构
E.破坏红细胞表面的唾液酸分子
[答疑编号700810050107]
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某些细菌性感染的患者，之所以A型血被鉴定为AB型，是因为
A.红细胞被大量抗体包被
B.特异性A型物质末端N-乙酰胺基半乳糖水解成半乳糖
C.A或B抗原变弱
D.细菌酶消化了红细胞表面的唾液酸，暴露出T抗原
E.红细胞血型出现嵌合体
[答疑编号700810050108]
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AB0血型系统的IgM抗体最适温度为
A.4℃
B.22℃
C.4℃～22℃
D.37℃
E.25℃
[答疑编号700810050109]
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红细胞Rh血型系统检查
要点1：
Rh遗传基因位于第1号染色体的短臂上，Rh血型有3个紧密相连的基因位点，每一位点有一对等位基因（D和d，C和c、E和e），这3个基因是以一个复合体形式遗传。3个连锁基因可有8种基因组合，即CDe、cDE、cDe、CDE、Cde、cdE、cde和CdE，两条染色体上的8种基因组合可形成36种遗传型。
要点2：
Rh抗原命名为C、D、E、c、d、e，虽从未发现过d抗原及抗d活性，但仍保留“d”符号，以相对于D。因此，Rh抗原只有5种，有相应5种抗血清，可查出18种Rh表现型。临床上，习惯将有D抗原者称Rh阳性，而将虽有其他Rh抗原而无D抗原者称为Rh阴性。D阴性人中最常见的基因型为cde／cde。
已发现40多种Rh抗原，与临床关系最密切的5种为D、E、C、c、e，这5种抗原中D的抗原性最强，对临床更为重要。
DU（弱D）：为一组弱D抗原。尽管DU的抗原性较D为弱，但仍是Rh阳性细胞，所以将DU血输给Rh阴性受血者时，仍有引起产生抗D的可能性，因此应将DU型供血者作Rh阳性处理，而DU型受血者归入Rh阴性则较为安全。如果把DU血输给有抗D者，也可以产生严重的溶血性输血反应。
-D-：-D-/-D-遗传基因型红细胞只有D抗原，而缺乏C、c、E、e抗原。此型能与抗D抗体在盐水中凝集。
要点3：
Rh抗体中，除偶尔可见天然的抗E、抗CW抗体外，其余各种Rh抗原的抗体多系输血或妊娠时，由外来红细胞免疫刺激后产生。这些抗体均为IgG，但在免疫应答的早期，也可有IgM成分。
D抗原是非AB0红细胞抗原中免疫性最强的抗原，可以引起抗D的产生，抗D与D红细胞产生严重的溶血反应。习惯将D阴性者认为是Rh阴性，多不再进行其他Rh抗原检测，除D抗原外，通常抗E和抗c比较多见。抗CW及抗其他Rh抗原的抗体偶尔也可引起迟发性溶血性输血反应或新生儿溶血病。
要点4：
红细胞Rh表型可用特殊的具有抗D、C、c、E和e抗血清检测来鉴定。虽然Rh血型系统中有许多种抗原，但常规只用抗D血清检查有无D抗原。当有特殊需要如家系调查、父权鉴定、配血不合等情况时才需用抗C、抗c、抗E、抗e等标准血清做全部表型测定。Rh抗体属IgG，不能在盐水介质中与红细胞发生凝集，因此必须采用以下几种鉴定方法。
1.低离子强度盐水试验：可提高抗D抗体与D阳性红细胞结合率，并提高其灵敏度。
2.酶介质法：木瓜酶或菠萝酶可以破坏红细胞表面的唾液酸，使红细胞膜失去电荷，缩小红细胞间的距离；同时酶还可以部分地改变红细胞表面结构，使某些隐蔽的抗原得以暴露，增强凝集性；且对IgG的作用大于IgM，故有利于检出不完全抗体。
试剂：IgG型抗D标准血清、1%木瓜酶（或菠萝蛋白酶）溶液、5%D阳性红细胞生理盐水悬液、5%D阴性红细胞生理盐水悬液。
要点5：
注意事项：
①Rh血型系统的抗体多由获得性免疫产生，血清中很少有天然抗体，故不需要做反定型。
②对照：酶易失活，故每次试验都要设置阳性对照。若阳性对照不出现凝集，表明酶或抗血清已经失效。酶活性过强出现假阳性结果，因而要设立阴性对照，以排除假阳性。只有在阳性对照管出现凝集而阴性对照管不凝集的情况下，才说明被检管的结果是可靠的。
③结果阴性：说明被检红细胞上无相应抗原，但由于DU抗原性弱，因此，如被检者无凝集，还应进一步检查以排除DU的可能。
要点6：
（四）交叉配血法
Rh血型系统的交叉配血的原则与AB0血型系统的交叉配血相同。由于此系统的抗体为不完全抗体，故应选用酶介质法、抗球蛋白法或聚凝胺法等。
要点7：
质量控制
1.严格设定试剂和抗原阳性和阴性对照系统。
2.严格控制反应条件：试验介质、浓度、温度、离心、反应时间等条件。
3.受检者红细胞必须洗涤干净，以免血清蛋白中和抗球蛋白，出现假阴性。
要点8：
Rh血型系统临床意义
抗Rh抗体主要通过输血或妊娠免疫而产生，较大量的Rh阳性（D抗原阳性）细胞进入Rh阴性者体内后，2～5个月内血浆中可测到抗体，如经再次免疫，3周内抗体浓度可达高峰。
受血者或孕妇血浆中含有Rh抗体时，当再与含相应抗原血液相遇，将引起严重输血反应或新生儿溶血病（常为第2胎溶血）。因此Rh抗体具有十分重要的临床意义。
练习题
Rh阳性血型是指红细胞上含有
A.C抗原
B.D抗原
C.E抗原
D.c抗原
E.d抗原
[答疑编号700810050201]
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Rh血型鉴定不能使用下列哪种方法
A.低离子强度盐水试验
B.酶介质法
C.抗人球蛋白法
D.聚凝胺法
E.盐水介质法
[答疑编号700810050202]
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关于酶介质法的描述，错误的是
A.木瓜酶或菠萝酶可以破坏红细胞表面的唾液酸
B.酶还可以部分地改变红细胞表面结构
C.对IgG的作用大于IgM
D.不利于不完全抗体的检出
E.使某些隐蔽的抗原得以暴露，增强凝集性
[答疑编号700810050203]
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孕妇发生Rh不合的新生儿溶血，常发生在
A.第1胎
B.第2胎
C.第3胎
D.怀孕后期
E.怀孕早期
[答疑编号700810050204]
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新生儿溶血病检查
要点1：
发病机制
新生儿溶血病（HDN）主要原因为母婴血型不合，孕母体内IgG类血型抗体通过胎盘进入胎儿体内，胎儿红细胞被母亲的同种抗体包被，这种抗体是针对胎儿红细胞上父源性的抗原。被包被的红细胞在分娩前后加速破坏，发生溶血，造成胎儿发生以溶血为主要损害的一种被动免疫性疾病。
主要表现为：
①贫血：正常新生儿血红蛋白为170～220g／L，此时病儿的血红蛋白多低于170g／L，甚至低于120g／L。
②高胆红素血症：由于溶血后产生大量胆红素，浓度可达255～340μmol／L，超过340μmol／L可疑存在核黄疸，血清中未结合胆红素增高。患儿皮肤严重黄染。
③肝脾肿大：由于贫血使器官组织缺氧，导致代偿性肝脾肿大。
④组织水肿。
⑤肌张力减低，各器官功能障碍等。
本病的血型抗体以抗A，抗B，抗A、B，抗D等为多见，病情程度从重到轻依次为：抗D抗体、Rh系统其他抗体、AB0血型抗体。
要点2：
新生儿溶血病实验室检查及诊断依据
HDN的诊断除应注意产妇的妊娠史，分娩史、输血史及健在子女的血型和健康状况外，无论对诊断与治疗，实验室诊断都是非常重要的。
1.确诊患婴的依据
（1）红细胞直接抗球蛋白试验阳性：从患儿红细胞上直接查到了被吸附的抗体，证明红细胞已经受累。本试验为直接证据。
（2）从红细胞上释放了具有血型特异性的抗体：①用热释放法检查AB0血型不合婴儿的红细胞是否释放了抗A，抗B，抗A、B抗体或AB0血型系统以外的抗体。②用释放法检查Rh血型不合的婴儿红细胞是否释放了抗D、抗C或抗E抗体。本试验也为直接证据。
（3）血清中存在与患婴红细胞上抗原相对应的游离抗体。
2.辅助诊断依据
（1）高胆红素血症：出生时脐血胆红素超过85.8μmol／L（50mg／L），24h血清胆红素超过102.6μmol／L（60mg／L），且以未结合胆红素为主。
（2）孕母血清内查到与胎儿红细胞不相合的完全抗体。
3.产前试验
如怀疑有HDN可能时，最好在产前开始检查，以期及早诊断及采取适当的预防与治疗措施。（1）血清学检查：首先要对孕妇做AB0血型系统及Rh系统的D抗原检查及不规则抗体筛选，所有筛选出阳性抗体都要区别是IgG或IgM，并应进一步做抗体鉴定分析，以确定是否会引起HDN。因为抗体的存在并不一定都会发生HDN。
（2）羊水分析：有必要时，并且在有条件的情况下可以做子宫穿刺抽取羊水进行分析，检查胎儿血型物质，确定胎儿血型。在450nm处测定胆红素含量的吸光度值，吸光度值越高表示宫内溶血越严重。
自动化血型分析仪
要点1：
原理
1.凝胶微柱法：在凝胶微柱介质中，红细胞抗原与相应抗体结合，经低速离心凝集的红细胞悬浮于凝胶中，未和抗体结合的红细胞则沉于凝胶底部。
2.玻璃柱法：微柱中装有细小的玻璃柱，利用离心力将凝集的红细胞阻于微柱的上端，未凝集的红细胞通过微柱间的缝隙到达微柱的底部。
主要用途
AB0血型鉴定、Rh血型鉴定、交叉配血、抗体筛检，抗体鉴别。
检测特点，主要有：
①操作 规范、标准和简便、省时、安全。
②灵敏度高、准确性好。
③结果 直观稳定、可靠清晰、易于保存。
④数据可电脑管理。
质量控制
1.标本：应及时检测，否则应贮存于2℃～8℃，并在规定的时间内检测。标本溶血出现假阴性。标本存在纤维蛋白或凝块、蛋白量异常或有自身抗体出现假阳性。
2.试剂：应保存于2℃～25℃，不能冷冻。微柱破裂和产生气泡出现假阳性。
3.操作：器材污染可出现假阳性。加样必须准确，使用3%～5%红细胞悬液。
人类白细胞抗原检查
要点1：
HLA是糖蛋白抗原，又称组织相容性抗原、移植抗原和组织抗原。HLA由一系列紧密连锁的基因编码，这些基因称为组织相容性复合物（MHC），也称为HLA基因，定位在第6号染色体短臂上，共有6个座位，至少含4个与移植有关的基因区：即HLA-A，HLA-B，HLA-C和HLA-D。HLA-D又分为HLA-DR、HLA-DQ、HLA-DP亚区。
HLA-A、HLA-B、HLA-C基因编码的抗原称Ⅰ类抗原。HLA-DR、HLA-DQ、HLA-DP基因编码的抗原称Ⅱ类抗原。
HLA也存在于其他许多组织细胞上，是调控人体特异性免疫应答和决定疾病易感性个体差异的主要基因系统，在破坏表达外来抗原的靶细胞方面有重要作用，通过HLA配型能提高移植物的存活率；HLA已用于有关疾病及人类遗传学的研究，也有助于提高成分输血的疗效及防止输血反应。
HLA抗体：大部分是IgG、少数是IgM。
要点2：HLA分型方法
1.淋巴细胞毒试验：为HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴细胞膜上的HLA抗原与相应抗体结合后，在补体作用下，细胞膜损伤，细胞溶解破裂被染色，计算显微镜下观察着色细胞的百分率（＞20%为阳性反应）。Ⅰ类抗原分型时可用T淋巴细胞或外周血淋巴细胞；进行Ⅱ类抗原分型时需用B淋巴细胞。
2.混合淋巴细胞培养试验：多用于组织相容性方面的研究，临床上主要用于器官移植。
3.分子生物学技术：一类是PCR为基础的基因分型，一类是以测序为基础的基因分型。
要点3：
HLA检测临床意义
1.器官移植：HLA配型的作用为：①在肾移植中，供受双方共有的DR抗原越多，或已检出的DR错配抗原数越少，移植存活率就越高。②在移植前输血的患者中，DR配型能提高存活率。③骨髓移植前不宜输血，以防受体被免疫。心、肝、肺等器官的移植，多用于生命垂危的患者，主要要求AB0血型相同。
2.输血：成分输血疗法时，如HLA同型血液，则能提高疗效。临床输血的发热反应中，有些是由HLA抗体引起，尤其是多次输血的患者，HLA抗体可以破坏白细胞，为避免HLA引起输血反应，可在输血前做交叉淋巴细胞毒试验。在70%的非溶血性输血反应是发热反应，一般认为是白细胞被HLA抗体破坏后释放致热原物质所致。可先将白细胞过滤后再输血。
3.亲子鉴定：由于HLA系统的高度多态性，使HLA成为亲子鉴定中的一个有力工具，具有重要法医学意义。
4.疾病诊断：发现许多疾病与HLA有关，例如强直性脊椎炎患者91%带有B27抗原，而正常人带B27抗原者只占6.6%。但目前大多数疾病的HLA分型意义有限。
血小板血型系统检查
要点1：
血小板表面有2类抗原：一类是为非特异性抗原或血小板相关抗原，与AB0血型系统和HLA有关，另一类是血小板特异的抗原。人类血小板特异性抗原（HPA）有5个血型系统和10个抗原，为HPA-1（Zw）、HPA-2（Ko系统）、HPA-3、HPA-4、HPA-5。
同种抗体：由输血或妊娠等同种免疫产生，多为IgG型。自身抗体：多在原发性血小板减少性紫癜中检出，也多为IgG型。
要点2：
临床意义
1.提高血小板输注疗效：选择与患者血小板和HLA相配的供血者，可提高输注浓缩血小板效果。
2.诊断新生儿同种免疫血小板减少性紫癜。
3.诊断原发性血小板减少性紫癜。
血液保存液
要点1：
血液保存液常用种类配方可分为：ACD（A，枸橼酸；C，枸橼酸三钠；D，葡萄糖）与CPD（C，枸橼酸三钠；P，磷酸盐；D，葡萄糖及枸橼酸）两大类保存液。在CPD中加腺嘌呤即为CPDA-1。
血液保存液主要成分
（1）枸橼酸盐：是所有抗凝保存液中的基本抗凝物质。最常用的是枸橼酸三钠，除抗凝作用外，它还能阻止溶血的发生。
（2）枸橼酸：避免保存液中的葡萄糖在消毒中焦化。
（3）葡萄糖：是红细胞代谢所必需的营养成分，可延长红细胞保存时间，且防止溶血；并减慢细胞中有机磷的消失，防止红细胞储存损伤。
（4）腺嘌呤：可促进红细胞ATP合成，延长红细胞的保存期（达35天），并增强红细胞放氧功能。
（5）磷酸盐：提高保存液pH，延长红细胞的保存期。ACD液pH较低，对保存红细胞不利，只能保存21天，且放氧能力迅速下降。CPD保存液中加入腺嘌呤与磷酸，从而延长红细胞的生存期。
要点2：血液制品贮存温度和时间
血液制品 | 贮存温度 | 贮存时间 |
全血和红细胞制剂 | 2～6℃ | 21天（ACD） |
2～6℃ | 35天（CDPA-1） | |
洗涤红细胞 | 2～6℃ | 24天 |
浓缩血小板 | 20～24℃ | 7天 |
浓缩粒细胞 | 20～24℃ | 24h |
新鲜冰冻血浆、冰冻血浆、冷沉淀物 | ＜-30℃ | 1年 |
低温冷冻红细胞 | ＜-65℃ | 10年 |
输血与输血反应
要点1：
输血适应证
主要有：①出血；②严重贫血；③低蛋白血症；④严重感染；⑤凝血障碍。
全血输注：全血是指血液的全部成分，包括各种血细胞及血浆中各种成分，还有抗凝剂及保存液。全血有保存全血及新鲜全血之分。常用保存于（4±2）℃的全血。
新鲜全血定义难以统一规定，要依输血目的而定。为了补充新鲜红细胞，可用保存5天的ACD全血或10天的CPD全血；如同时还要补充血小板或白细胞，则应分别用保存1天及12h内的全血。
全血中主要是含有载氧能力的红细胞和维持渗透压的白蛋白，可应用于：
①各种原因（手术、创伤等）引起的急性大量失血需要补充红细胞及血容量时。
②需要进行体外循环的手术时。
③换血，特别是新生儿溶血病换血。
全血输注缺点有：全血中所含血小板与白细胞可引起的抗体，可在再输血时引起反应；对血容量正常的人，特别是老人或儿童，易引起循环超负荷。
目前，全血输注已逐渐减少，而代之以成分输血。
成分输血优点：
①疗效高：将血液成分提纯、浓缩而得到高效价的制品。
②反应少：可减少输全血引起各种不良的抗原抗体的免疫反应。
③合理用血液成分：将全血分离制成不同的细胞及血浆蛋白成分，供不同目的应用。
④经济：既可节省宝贵的血液，又可减低患者的医疗费用。
红细胞输注：
①少浆血。
②浓缩红细胞。
③代浆血或晶体盐红细胞悬液。
④少白细胞的红细胞。
⑤洗涤红细胞。
⑥其他：冰冻红细胞、年轻红细胞、照射红细胞等。
主要用于需要输注红细胞的患者，适用于：
①任何原因的慢性贫血均可输注浓缩红细胞，因对血容量影响较少而不会引起心功能不全或肺水肿。
②急性失血如无全血时，可输入代浆血。
③洗涤红细胞：最常用于因输血而发生严重过敏的患者。
④如输血后有反复发热的非溶血性输血反应时，可输少白细胞的红细胞。
粒细胞输注：应用浓缩白细胞应十分慎重，因为粒细胞可引起输血副作用。主要适应证：
①用于治疗：当患者白细胞少于0.5×109／L、有严重细菌感染而经抗生素治疗24～48h无效时。
②用于预防：当治疗白血病或骨髓移植后引起粒细胞缺乏症时，输白细胞可能减低合并严重感染的危险，但引起副作用的弊病可能更大。
③新生儿败血症，可明显减低其死亡率。输粒细胞时必须用与患者AB0和Rh同型的血液，若HLA血型相配则更为有益。
血小板输注：
①富含血小板血浆。
②浓缩血小板。
③少白细胞血小板。
输血小板的适应证：
①血小板数减少：一般血小板数＜20×109／L且合并出血时应给输血小板。
②血小板功能异常：如血小板无力症、血小板病、巨大血小板综合征、药物或肝肾功能引起的血小板功能异常等。
血浆及血浆蛋白输注：
血浆适应于：
①患有导致一种或多种凝血因子缺乏的疾病，如DIC等。
②肝功能衰竭而伴有出血倾向时。
③应用华法林等抗凝药物过量等。
血浆白蛋白：
主要用于补充血管内或血管外白蛋白缺乏。扩充血容量是使用白蛋白的重要指征，如：血容量损失50%～80%者、白蛋白丢失（烧伤等）、体外循环、失代偿肝硬化。
免疫球蛋白输注：
①预防某些传染病和细菌感染，如麻疹、传染性肝炎等，可使用正常人免疫球蛋白
②代替异种血清制品，如破伤风免疫球蛋白，以避免不良反应。免疫缺陷疾患、新生儿败血症等，可用正常免疫球蛋白或静脉注射免疫球蛋白。
凝血因子制品输注：
①新鲜冰冻血浆：含有全部凝血因子，可用于凝血因子缺乏患者。
②Ⅷ因子浓缩剂：可用于甲型血友病止血治疗及出血的预防。也可用DNA重组技术。
③凝血酶原复合物浓缩制剂：是一种混合血浆制成的冻干制剂，含有维生素K依赖性的Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、X因子。可用于血友病出血的治疗。
自身输血：由于输血传播疾病，，现已重视自身输血法。
自身输血的意义：
①有利于稀有血型输血。
②避免输血反应血型抗原等引起的同种免疫或免疫作用而引起的过敏反应。
③避免输血传染疾病等。
④自身输血者反复放血，可刺激红细胞再生。
⑤为无条件供血的地区提供血源。
要点2：
常见输血不良反应：
1.免疫性
溶血反应、非溶血性发热反应、过敏反应、荨麻疹、非心源性肺水肿、移植物抗宿主病、输血后紫癜、对红细胞、白细胞、血小板或血浆蛋白的同种（异体）免疫等。
2.非免疫性
高热（有休克）、充血性心力衰竭、理化性溶血、空气栓塞、出血倾向、枸橼酸钠中毒、钾中毒、血液酸化、高血氨、含铁血黄素沉着症、血栓性静脉炎、疾病传播（乙肝、丙肝、、、疟疾，巨细胞病毒感染等）。
要点3：
输血传播性疾病
常见的有：乙型、丙型肝炎，，巨细胞病毒感染，，疟疾，弓形体病等。献血者有EB病毒感染，黑热病、丝虫病、回归热感染时，均有可能通过输血传播。此外，如血液被细菌污染，可使受血者由此引起菌血症，严重者可致败血症。在由输血引起的疾病中，。
预防
（1）肝炎：采用灵敏的乙型与丙型肝炎的筛选试验。对献血者和血液制品严格进行乙型与丙型肝炎血清学检测；提高献血者人群肝炎试验的灵敏度与特异性；提高血浆制品中肝炎病毒灭活效果；提倡使用一次性注射器和输血、输液器；对血液透析机应彻底消毒；所有被血液污染的物品和工作台面需彻底消毒处理；工作人员进行血液检验时需戴手套。
（：
检测血清HIV抗体的初筛试验可选择酶联免疫吸附试验（ELISA）、明胶颗粒凝集试验（PA）、免疫荧光法（IF）、免疫酶法（IE）和乳胶凝集试验（LA），或其他世界卫生组织评价过的方法，可以使用混合血清法对献血者进行HIV抗体筛检。
多聚酶链反应（PCR）技术现已开始用于HIV、HBV、HCV和CMV感染的诊断，但由于此种技术操作复杂，试剂昂贵，还需一定的仪器设备，故目前尚不能普遍用于献血者的检查。
确认试验可选择蛋白印迹法（WB）或由卫生部门指定其他卫生组织评价或推荐方法。
外科手术最提倡
A.自身输血
B.成分输血
C.输全血
D.输血浆
E.输血浆代用品
[答疑编号700810050205]
| |||
自身免疫性溶血病人需要输红细胞时，应输
A.少浆血
B.浓缩红细胞
C.晶体盐红细胞悬液
D.少白细胞的红细胞
E.洗涤红细胞
[答疑编号700810050206]
| |||
甲型血友病患者需要定期输注
A.新鲜冰冻血浆
B.Ⅷ因子浓缩剂
C.凝血酶原复合物浓缩制剂
D.新鲜全血
E.血小板悬液
[答疑编号700810050207]
| |||
血液保存液中加入腺嘌呤和磷酸盐，主要作用是
A.避免保存液中葡萄糖在消毒中焦化的作用
B.阻止溶血发生作用
C.起抗凝作用
D.延长红细胞的保存期
E.提供红细胞代谢所必需的营养成分
[答疑编号700810050208]
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