原料药质量研究中无机杂质的控制

　　无机杂质多由生产过程中引入，在贮存过程中引入的可能性相对较小，一般包括以下几种途径：1、起始原料引入，特别是复杂的原料(有机物)，可从该起始原料的合成路线、中间体检测报告得出信息;2、反应过程中的副产物或未反应完全的试剂，如：钠盐、硫酸盐、氯化物、硫化物等;3、生产过程所用的金属器皿、管道以及其他不耐酸、碱的金属工具，则可能引入砷盐，以及铅、铁、铜、锌等金属杂质。

　　从上述过程来看，无机杂质一般是已知和确定的，包括试剂、配位体、催化剂、重金属、无机盐、其它杂质(例如：过滤介质、活性碳等)。按性质可分为信号杂质(或指示性杂质)和有害杂质。信号杂质本身一般无害，但其含量的多少可反映药物的纯度水平，如氯化物、硫酸盐;有害杂质对人体有害，可在体内蓄积，主要指砷盐、重金属等。下表是ICH和美国药典对杂质种类的划分以及进一步细

 表一：ICH和美国药典对杂质种类的划分以及进一步细分

　　通常来看，如果在生产过程中可能引入无机杂质时，则应进行针对性研究，由于药物降解产生无机杂质的可能性相对较小，在稳定性研究中一般可不做考察。

　　(一)无机阴离子

　　中国药典纳入的无机阴离子包括硫酸盐、氯化物、硫化物、氰化物、磷酸盐、含磷物质、氰酸盐、碘化物、碘酸盐、硝酸盐、氟化物、溴化物、硫代硫酸盐等。　硫酸盐、氯化物：信号杂质，多用于不能以其他更直接的方法控制确切的杂质时，考察样品纯度是否达到一定要求，不作为质量标准的普遍要求。中国药典纳入的几种药物限度分别为：丙磺舒(氯化物0.018%)、磷酸咯萘啶(氯化物0.0.3%)、富马酸亚铁(硫酸盐0.2%)。

　　硫化物：有毒杂质，应注意药典附录硫化物检查法中标准硫斑固定为5μg的硫(s)，供试品的量应与之匹配。中国药典纳入的几种药物限度分别为：黄凡士林(0.00017%)、对氨基水杨酸钠(0.001%)。

　　氰化物：有毒杂质，药典收载中纳入两种方法，可以检出达到痕量级。中国药典纳入的碘解磷定限度为0.0005%。

　　(二)金属离子与重金属

　　中国药典纳入的金属离子包括碱金属，碱土金属、铜、锌、镍、铅、铁、硒、砷盐等。对重金属的检查不同于对单一金属离子的检查，后者是具有针对性的。

　　硒：毒性杂质，主要来源于生产工艺，如某些甾体激素类药物，在生产中使用了二氧化硒脱氢，可能引入该杂质。中国药典纳入的醋酸曲安奈德限度为0.005%。

　　砷盐的检测在中国药典2005版二部收载有两种方法：古蔡氏法和Ag-DDT法(二乙基二硫代氨基甲酸银法)。一般可根据需要任意选择，须注意的是各供试品中规定含砷限度不同,采用改变供试品取用量的方法来适应要求,而不采用改变标准砷溶液取用量的办法。因标准砷斑过深或过浅均会影响比色的准确性.，一般取用2ml标准砷溶液进行检测。而砷盐的定量可采用Ag-DDT法，通过制备标准曲线准确测量砷盐的浓度，也可以通过原子吸收、原子荧光、ICP-MS制备标准曲线进行定量，精度可以做到ppm-ppb级。中国药典纳入的几种药物限度分别为：氯化钠(0.00004%)、枸橼酸铁铵(0.0005%)、磷酸氯喹(0.0005%)。

　　重金属指在pH3.5的醋酸盐缓冲液的条件下能与显色剂(硫代乙酰胺试夜)或硫化钠作用的所有金属盐类的总称。包括银、铅、汞、铜、镉、铋、锑、锡、砷、镍、钴、锌盐等，生产中遇铅的机会较多，又易在体内积蓄中毒，因此检查时多以铅为代表。中国药典2005年版收载有4种方法：

　　第一法：一般应用于无机药物。溶剂一般为水、盐酸溶液或氢氧化钠溶液，必要时使用乙醇。适宜pH侄为3.0～3.5。一般均用水溶解后加入醋酸盐缓冲液(pH值3.5)2ml，酸度过大会影响沉淀的产生，降低检测灵敏度。同时以10～20ugPb/35ml与显色剂所产生的颜色为最佳目视比较范围，这在质量研究中对检验方法的指定有指导意义。如高铁盐在弱酸性溶液中会使硫代乙酰胺水解生成的H2S氧化析出乳硫，产生浑浊，影响检查。可加入抗坏血酸。必要时采用内消色法和外消色法两种方法。

　　第二法：适用于难溶于水、乙醇或与重金属离子配位化合，不能用第一法进行重金属检查的有机药物。须经有机破坏后检测。温度控制：500～600℃。温度过高，会使多数重金属盐都有不同程度的损失。

　　第三法：适用于能溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。

　　第四法：微孔滤膜过滤法，用于含2～5ug重金属杂质的检查，比较砷斑，提高检查的灵敏度。显色剂1ml，显色时间延长为10分钟。以上方法仅能对铅盐作限度控制，铅盐的定量一般采用样品经提取、炽灼、微波消解等适宜的方法处理后通过原子吸收(多采用石墨炉)、原子荧光、ICP-MS制备标准曲线等方法进行定量。定量精度可以做到ppm-ppb级。

　　限度：一般来说用于口服的原料药控制在小于百万分之20，用于注射用的原料控制在小于百万分之10。注射液的计算一般有二种，如葡萄糖注射液，限度为葡萄糖的百万分之5，折算为按注射用水计算为的百万分之0.25;氯化钠注射液，限度为注射用水的百万分之0.3。二者限度基本一致。

　　表二 各国药典重金属方法比较

　　同时，重金属问题是近年来国外对中药毒性争议的焦点问题之一。由于我国目前还没有常用中药中重金属残留量的数据库，也还没有对重金属可能的污染来源进行分析和监控。中国药典2005年版一部附录IX B“铅、镉、砷、汞、铜检查法”采用原子吸收法和电感耦合等离子体质谱法，原有的砷盐检查法、总重金属检查法等予以保留。

　　1)原子吸收法(AAS)分为以下四种：

A、火焰原子吸收法(FAAS) ：操作简便，重现性好，但由于其灵敏度和检测限的限制，一般只适用于中药中残留含量相对较高的元素的测定(一般含量应在百万分之5以上)。适用于Cu的测定;

B、石墨炉法(GFAAS)：应用最为广泛，其样品用量少，测定灵敏度高，采用适宜的基体改进技术和背景校正技术，可消除大部分杂质的干扰。适用于Pb、Cd、Cu的测定;

C、氢化物发生法(HGAAS)：将待测元素在酸性介质中还原成沸点低、易受热分解的氢化物，再由载气导入由石英管、加热器等组成的原子吸收池，在吸收池中氢化物被加热分解，并形成基态原子，氢化物法具有比石墨炉法更好的检测限并且受干扰的程度比较低。适用于As的测定;

D、冷原子发生法(CVAAS)：基于汞的独特性质，专用于汞的测定，其仪器装置与氢化物法基本一致。适用于Hg的测定。

　　2)电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)可用于绝大多数金属元素分析。检测限低，可同时完成多元素的测定，具有极高的检测效率，是目前痕量元素分析领域中最先进的方法。

　　表三 三种方法比较

　　(三)炽灼残渣

　　系指硫酸化灰分，以转化为硫酸盐的重量计算，以考察不挥发各种无机杂质。化合物本身炽灼后应无残留，残留物多为金属的氧化物或硫酸盐，主用于考察阳离子，与阴离子无关。含氟或碱金属的药物采用铂金坩埚检测以避免腐蚀。

　　综上所述，各国药典都收载了经典、简便、行之有效的检测方法。随着技术的发展，原子吸收、原子荧光及采用离子色谱及电感耦合等离子发射光谱-质谱(ICP-MS)等技术广泛的应用，对部分无机杂质的检测精度和专属性大大提高，有助于对该类杂质的进一步控制。有鉴于此，我们认为：申请人在进行药物研发时，应根据实际情况采取合理的方法对无机杂质进行考察，在考察过程中，应考虑来源、生产工艺等因素对药物安全性、有效性的影响，并有针对的进行控制。

　　上述为个人结合审评中的认识所提出的观点，欢迎药品注册申请人就此问题进行交流和讨论。

转自：E药研发

【编辑：任金凤】