一群免疫细胞的流式细胞神奇之旅

世界上第一台商用流式细胞仪出现，它能系统性地结合流体学、光学和电子系统，并利用其荧光和物理特性检测各种微粒体。可以说它，是一种有效地从单细胞水平区分异质性细胞群体的技术。

这是一个组织原则问题，检测的样本在进入流式细胞仪之前，必须是单细胞悬液。因此，外周血细胞或悬浮生长的细胞最适合流式分析。

一般如果从血液中分离我们，可以使用梯度离心，直接把我们这个大家族分离出来，或者把红细胞裂解掉，再把我们分离出来。

贴壁细胞、实体组织或肿瘤组织在进行流式染色之前，还必须根据他们的特性，利用各种方法制成单细胞悬液。

想要被流式细胞仪辨认，需要用各种荧光染料（荧光结核抗体）对我进行标记。激光器能够发射用来激发荧光染料的特定波长的光线，荧光染料吸收光线之后，发射出可以被流式细胞仪检测的荧光。

利用荧光结合抗体标记细胞表面标记物，并进行流式细胞分析后，可以根据细胞谱系和发育阶段确定我是哪个亚群以及有哪些功能了。

例如，CD4就是一种辅助性T细胞的表面标记物，比如CD3是T细胞的标志，CD19是B细胞的标志等。

注意，不仅仅是细胞表面蛋白可以用来染色，细胞内的特定蛋白（细胞液、细胞核）也一样可以用来进行染色。

确认我的死活是流式细胞实验中的关键环节。死细胞会与抗体非特异性结合，而影响数据的准确性。因此，必须从分析中排除死细胞的影响。

比如PI和7-AAD还有FVD可用来染色死细胞，该染料不能通过完好的细胞膜，但可通过已破坏的细胞膜进入胞内。

利用可穿透细胞膜的eFluor® 514和Indo-1 AM钙离子敏感染料，结合荧光显微镜、流式细胞术、分光光度计和荧光酶标，监控我体内游离钙的浓度变化。

可以利用亲脂性染料来标记我的细胞膜，以识别和跟踪我。比如细胞增殖染料（CPD）eFluor® 670可以在体内跟踪未分裂的细胞数周。该染料与细胞蛋白质形成共价反应。随着细胞分裂，该染料会均分到子代细胞中，荧光强度减为原来的一半。

 细胞凋亡是我的一种自主有序的死亡，伴有一系列细胞特征的改变，包括DNA降解、线粒体膜电位下降、细胞膜上脂质的不对称分布被破坏。这些变化都可以利用对其具有敏感性和特异性的染料和试剂，通过流式细胞仪检测。