生化分析仪50问,从此不求人(下)

（ 26 ）问题： 新设定一个计算实验后，仪器不能正常工作，在退出时显示“ Total Sample:Item ” , 是何原因？

答：在 P-I 中， SV （标本量） +DIL VOL （吐水量） +R1 （试剂 I ） +DIL VOL （吐水量） +R2 （试剂 II ） +DIL VOL （吐水量）；在 AU400/600/640 应在 150-550 微升之间，在 AU2700/5400 应在 120-440 微升之间。

（ 27 ） 问题： 新设定一个计算实验后，仪器不能正常工作，在退出时显示“ R1+Dilution Volume:Item ” , 是何原因？

答：在 P-I 中， R1 (试剂 I ) +DIL VOL （吐水量）在 AU400/600/640 应小于 300 微升, AU2700/5400 应小于 250 微升。

（ 28 ） 问题： 新设定一个计算实验后，仪器不能正常工作，在退出时显示“ Number of Muti:Item ” , 是何原因？

答：在 P-Q-I 的质控参数编辑中，一个项目只能有两个“ Muti ”，表示用这两个项目画二维质控图（ Twin Plot ），多了或者少了仪器都不能正常工作。

（ 29 ） 血清磷的测定有时偏高 1 倍以上，复查结果正常，为什么？

答：交叉污染，例如仪器试剂针加完含磷酸盐的试剂（ BG ），再加磷试剂，当冲洗不完全时造成污染。解决方法： A. 调整试验顺序，把磷项目放在前面，先测定即可避免污染. B. 利用仪器本身提供的抗交叉污染程序，通过增加冲洗次数可避免污染 。

（ 30 ）溶血、黄疸、乳糜血对临床生化的那些项目有干扰？

答：溶血、黄疸、乳糜对临床项目的干扰见以下表格（本结果仅供参考）

（ 31 ）测定结果后面有时出现标志 “ u “ , 是什么原因？

答：试剂空白的吸光度超出设定范围。

解决方法： A 如为试剂变质，则更换试剂； B 重新调整试剂空白的吸光度范围； C 如更换灯泡或做过保养，重新做杯空白 (PHOTOCAL) 。

（ 32 ）怎么样判断 K ， Na, Cl 电极膜破裂？

答：如果电极膜破裂，在 ISE 诊断中测定高值标准，底值标准和 MID 的电位值，如果三者电位值一致，没有明显区别。

（ 33 ） TG 测定时，质控高、低值都符合要求，病人结果偏低，为什么？

答：可能的原因是用户所用定标液为甘油（无色水剂），试剂中的关键酶（脂肪酶）量不足或者活性中够，就会造成这种现象。

（ 34 ） ISE 定标时， SLOPE 值突然下降 10 点以上，为什么？

答： Na,K,Cl Slope 值从 53 ， 55 ， 52 突然下降为 34,38,40. 常见原因： A. 定标液敞口放置时间过长，更换新定标液。 B. 清洗混匀棒。 C. 更换三通管。

（ 35 ）如何在 AU400/600/640 仪器实验自动重做？

答： 

⑴ .[Parameter]-[System]-[System] 中： Routine Test Requsition 由 Sequential—Rack No; Auto/Standard Repeat: 由 Stanard → Auto 。

⑵ 在 Online 参数中： 改成 Batch-None-Batch-None 。

⑶ 报警限确定（仅供参考）：见表 1 。

⑷ 重做规则以及相关实验： [Parameter]-[Repeat Parameter]-[Repeat Common] 中设置：

Repeat Normal or Mode: # ; ? ; * ; ! ; G ; P ; T

Dilution or Mode: @ ; $ ; D ; B ; & ; Z ; F

相关试验： ALB—TP ； DBIL—TBIL ； CKMB—CK ； TG—LDL 。

（ 36 ）为什么要定标？多长时间要定标一次？

答： 

⑴ 定标的意义： 定标就是要找出一个参考点，就是一个 K 值（或 F 值）。它是由仪器与试剂状态确定下来的。当我们测定一个标本时，无论您是用手工的方法或全自动生化分析仪，测出来的值只是一个吸光度，这个吸光度对我们没有什么意义，我们要把这个吸光度转换成一个浓度或是酶的活性。那就要乘上一个 K 值，计算并打印出来的结果对我们就有意义了。 K 值就是我们通过定标找出来的。一般上最低要求是有试剂空白与标准品。

经过仪器测定出两个吸光度：

标准浓度 - 试剂空白

A 标准 - A 试剂空白 （试剂空白通常是 0 ）

标准液的浓度我们是知道的，这两个吸光度可以由仪器测出，这样就得出一个 K 值。无论什么样的标本，用其吸光度乘以 K 值我们就得到了答案。因此， K 值具有非常决定性的意义，可以决定标本的准确性。

⑵ K 值的决定因素： 我们看看 K 值会受到什么影响呢？第一，标准液的浓度一定要准确（标准液最好与标本一样是以血清为基质的）。第二，标准液的吸光度与试剂空白的吸光度一定要准确。吸光度受仪器状况、试剂状况的影响，如果您的仪器相当稳定，试剂是影响 K 值的一个主要因素。

⑶ 如何确定 K 值是正确的？ 一般我们用质控血清来检查，最好是两种水平的质控来检查，如果质控结果很好，可以说 K 值是准确的，用这个 K 值计算出来病人的结果也是准确的，所以 K 值非常关键。

⑷ K 值的真面目： K 值实际上代表了斜率，截距代表试剂空白，试剂空白每天都在变化，所以 K 值的稳定性决定您的仪器与试剂，如果仪器与试剂都十分稳定，那 K 值也很稳定。

⑸ 多长时间定一次标合适？ 这要看您试剂的稳定性，质控结果不好，有些项目做试剂空白可以解决，有些项目要做两点定标。

⑹ 酶的项目如何确定 K 值：一是计算出来的理论 K 值；

TV ′ 1000

K= ————————

SV ′ L ′ e

二是用有酶项目的定标液得出 K 值： 目前 OLYMPUS 公司可以提供多项目的定标液，不仅有底物类的项目，也有酶类的项目。

（ 37 ） AU400/600/640 在编参数时有哪几项基本点？

答：

 Sample vol （样品量） ： 2 ~ 50 m l , 可以按 0.5 m l 为单位增减。 Dil vol. ( 稀释液 - 吐水量 ) ：一般建议样品量少于 5 m l 时，加 10 m l 水。

Reagent 1 vol （第一试剂量） ： 25 -300 m l, 可以按 1 m l 为单位增减。 Dil vol( 稀释液 - 吐水量 ) ：一般用浓缩试剂时才用。

Reagent 2 vol （第二试剂量） ： 25 -300 m l, 可以按 1 m l 为单位增减。 Dil vol( 稀释液 - 吐水量 ) ：一般用浓缩试剂时才用。第二试剂是固定的 10-11 点之间加入的。

Wavelength Pri: （主波长） Sec. （付波长）

测定波长共有十三种可以选择： 340,380,410,450,520,540,570,600,660,700,750, 800nm 。

Method （方法学） 共六种 ： End,Rate,Fixed;End1,Rate1,Fixed1 。

前三种与后三种的差别为：前三种是以试剂为空白的，后三种是以比色杯为空白的。

Reaction （反应方向） ： + ， - 。 End 与 Fixed 法不起作用，但是 Rate 法一定要输正确。

请记住！向下反应一般来说只有三种： AST 、 ALT 、 HBDH, 其它均为向上反应。

Point 1 Fst Lst

Point 2 Fst Lst 

（读点设置） Point1 为主测定， Point2 为辅助测定。

End 法： 

a ）单试剂：一般均为 0--27 ，特例： ALB 为 0—4 ；

b ）双试剂（有样品空白功能）： 0—27 ； 0—10 。

Rate 法：

 a ）单试剂：延迟时间较短的，一般输 4—10 。

b) 延迟时间较长的，一般输 21—27 。

Fixed 法：固定两个点之间去计算。

a) 单试剂苦味酸法肌酐： 1—4 ；尿素氮： 3—8 。

b) 双试剂苦味酸法肌酐： 11—14 ；尿素氮： 12—17 。

Linearity （线性） ： Fst Lst Rate 法才输入，一般国产试剂 30% ；进口试剂： 15% 。

No-Lag-Time ： Rate 法才输入，在读点期内，如果反应太快，超过线性（ Linearity 限）仪器会自动用线性比较好的那一段来计算。

Min OD L Max OD H （吸光度限）

Rate 法才输入，如果 Rate 法的反应，反应速度太快，出现了底物耗尽的情况，向下的反应会低于 Min OD ，向上的反应会超过 Max OD 。

Reagent OD Limit Fst. L Fst. H

Lst. L Lst H

试剂空白 OD 限 ： Fst 指的是 0 点， Lst 指的是 27 点。只对 Rate 法有用，一般向下的反应，输 0.9—2.5 ，向上的反应 -2.0—0.8 。

Dynamic Range L H ： 指的是试剂盒的线性范围。

ONBOARD STBLTY PERIOD 有条码的试剂在仪器上的稳定期。

Normal Range （正常范围） ： 可以按姓别、年龄输入正常范围

None selected （不分性别年龄的正常值） 如果什么都没有选择时的正常范围 （ AU600 在这里输入几位小数，结果就保留几位小数）

Out of Range 超出范围

Panic Value 报警值

Unit 单位

F7 ： Decimal Places 小数位

（ 38 ） Olympus 生化分析仪可以做前带检查吗？

答：可以，并且有三种检查方式，详见 [Parameter]-[Special]-[Datacheck Parameter] 。 Olympus 的 TG 试剂就有第一种检查法。

（ 39 ） CKMB ﹥ CK 会出现在什么情况？

答： 国内及国外的很多报道有上述现象 , 只要 CKMB 的升高不是由于溶血造成的 ,CKMB >CK, 这样的病例 95% 是 O 型或 B 型血的癌症患者 , 原因是部分癌症病人免疫系统混乱， 其中的一些免疫球蛋白充当的辅酶的作用。

（ 40 ）溶血标本可测定 CKMB 吗？

答：通常测定 CKMB 的标本应避免溶血，在 Olympus 的试剂与仪器配合可以基本上扣除这种干扰。

RBC 中并不含有 CKMB, 但 RBC 中含有 ADK, 一般厂家会在试剂中加入抑制剂 (5 磷 酸二腺酐 AP 5A ) 来抑制 ADK 的作用 , 但抑制率仅有 95-97%, 也就是说有 3-5% 没有被抑制 , 对于 正常的标本只升高 0-6U/L, 极端标本可能会到 35U/L, 只要应用双速率法 , 就可以扣除 ADK 的 干扰。

（ 41 ） CKMB 正常， CK 特别高可能会出现在什么情况的病人？

答：溶血标本、肌肉损伤、外科手术后、酒精中毒、肌营养不良等。

（ 42 ） OlympusCKMB 试剂中抗 M 亚基抗体的特异性如何？

答：在 37 ℃ 下最多可以达到 4000U/L, 特异性为 99.5%, 最多可有 20U/L 的干扰。

（ 43 ） Olympus 质控或定标液中应选哪种方法的靶值？

答：以下的表格为 Olymopus 定标液及质控血清中国建议使用的方法。

（ 44 ）标本的某一项或几项的结果是零或负数，复查后正常，其它标本的结果和质控结果均正常，可能是什么原因？

答：最常见的原因是血清表面有气泡。

（ 45 ）在酶项目分析中“ Serum Start ” ( 血清启动 ) “ Substrate Start ” ( 底物启动 ) 有什么区别？

答：通常血清启动为单试剂，加完标本就开始反应，底物启动一般为双试剂，标本与第一试剂没有反应，加完启动试剂（第二试剂）开始反应。

（ 46 ）如何判断水的质量？

答：此方法不一定科学，仅供参考： 取一只一次性的塑料试管，加一毫升左右的镁（二甲苯胺兰法）试剂，然后加一两滴水，5 分钟后观察有无变成红色，如变成红色表明所用的水中含有离子。

（ 47 ）如何排除仪器方面的问题？

答 ： 

(a) 光路 : 在仪器上设定一个项目为终点法 , 因数为 10000 给这个项目做空白定标 . 然后 , 把样品和试剂全部放成水 , 观察最后的结果 , 可以接受的范围是正负 15.

(b) 比色杯 : 奥林巴斯的仪器是做光电校正 , 日立仪器是做比色杯空白 , 不同的仪器有不同的标准 Ca,Mg 等项目对比色杯敏感。

（ 48 ）甘油三酯会发生类似免疫反应的前带现象吗？

答：会发生。甘油三酯的催化反应主要是基于 L- 甘油 -3 磷酸氧化酶与改良的 Trinder''s 反应。当 TG 大于 20mmol/L 时会有一个十分强烈的干扰反应，并经常发生在一些轻微乳糜的标本。产生干扰的原因是快速利用氧，反应处于厌氧状态， L- 甘油 -3 磷酸氧化酶与其电子受体作用使形成的颜色消退。

（ 49 ）如何判断试剂针与搅拌棒的交叉污染？

答：以 AU400/600/640/2700 为例，这些仪器都是三头搅拌棒： Px 为提供项目， Ra 为接受项目，做 20 个标本（混合血清），每个标本只做一个项目，按如下排列方式做：

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Px1 Ra1 Ra2 Ra3 Ra4 Px2 Ra5 Ra6 Ra7 Ra8

样品针： Data1 REF.1 Data2 REF.2

搅拌棒： Data1 REF.1 Data2 REF.2

以同样的方式做下一组标本，得到 Data3 、 Data4 、 REF3 、 REF4 。用以下方式研究：

100- （（ Data1/REF.1 ） *100 ）

100- （（ Data2/REF.2 ） *100 ）

100- （（ Data3/REF.3 ） *100 ）

100- （（ Data4/REF.4 ） *100 ）

（ 50 ）如何判断比色杯的交叉污染？

答： P 为提供项目， R 为接受项目，所有标本均为混合血清。以 AU400 为例 88 个比色杯要准备 176 份标本：

P1 P2 P3………P20 P21 22(Water) P23 P24………P42 P43 44(Water)

以此类推，第 66 与第 88 个标本的项目均为水。在同一个 ROUND 从第 89 到 176 个标本的项

目均 R 项目，后 88 个标本均为血清，不放水。那么第 110 、 132 、 154 、 176 号标本的结果为

参照结果（ REF ）从第 89 号到 176 号除外以上四个号码的标本均为受到比色杯干扰的结果。

以上的操作再重复一次。

公式： 100- （（受干扰结果的平均值 / 四个对照结果的平均值） *100 ）

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